OPTIMIZACIÓN EN LA RECUPERACIÓN DE INMUNOGLOBULINAS COMO MOLÉCULA ENTERA Y FRAGMENTO F(ab´)2 EN LA PRODUCCIÓN DE ANTIVENENOS

Silvana Litwin, Alberto Oscar Isabettini, Leandro Calderón, Liliana Mónica Varni

Resumen


En la actualidad se utilizan, principalmente, dos métodos de purificación  de anticuerpos a partir de plasmas equinos hiperinmunes para la producción de antivenenos a nivel industrial, obteniéndose preparaciones enriquecidas en moléculas de inmunoglobulinas G ó fragmentos F(ab´)2.

Con ambos métodos, luego de la precipitación, se observa una importante pérdida de capacidad neutralizante en comparación con la capacidad neutralizante de los plasmas de partida.

En éste trabajo, se realizó el fraccionamiento de plasmas equinos hiperinmunes utilizando ácido caprílico con y sin digestión enzimática con pepsina. El objetivo es explicar el porcentaje de recuperación de la capacidad neutralizante luego del fraccionamiento; siendo éste  menor cuando el plasma fue tratado enzimáticamente. Adicionalmente, se pretende establecer cuál es la etapa responsable en la diferencia de la recuperación de anticuerpos entre una metodología y otra.

Cuando  se purificaron las inmunoglobulinas enteras, se recuperó aproximadamente un 53% de la capacidad neutralizante mientras que cuando la muestra se purificó luego de  ser tratada enzimáticamente se obtuvo alrededor del 30% de esa actividad. Una relación de similar magnitud se verifica en la recuperación de la masa de proteínas solubles luego de remover los contaminantes, entre una metodología y otra.

La insolubilización del fragmento Fc generado durante la digestión sería el responsable de esa pérdida adicional de proteína y capacidad neutralizante.

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Acta Toxicológica Argentina ISSN 0327 9286 (impreso) - ISSN 1851-3743 (en línea). Alsina 1441, Of. 302, (CP 1088), C.A.B.A. www.ataonline.org.ar